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简述RNA提取试剂盒的正确操作步骤

发布时间: 2022-09-01  点击次数: 42次
  RNA提取试剂盒采用裂解液,只需将样品与裂解液A和B混合,经一步挂柱和洗脱即可快速可靠从组织、细胞、抗凝全血、病毒液样本中纯化出高纯度的总RNA。
 
  下面咱们来聊一聊RNA提取试剂盒的操作步骤:
 
  1、样品处理
 
  (1)植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
 
  (2)动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
 
  (3)贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。
 
  (4)细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
 
  (5)血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
 
  2、将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
 
  3、2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
 
  4、吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室温放置2分钟,2-812,000rpm℃离心2min,弃废液。
 
  5、第3步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-812000rpm℃离心2min,弃废液。
 
  6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-812,000rpm℃离心2min,弃废液。
 
  7、向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-812,000rpm℃离心2min,弃废液。
 
  8、12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
 
  9、将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min
 
  10、即得到RNA。

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